Practia: MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN

MÉTODO   DE    CONCENTRACIÓN      POR    SEDIMENTACIÓN

RITCHIE 

Fundamento: se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación,  con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios- unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias , permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIL Y EQUIPO

Centrifuga tubos de ensaye cónicos de 15 ml                  soluc. Salina isotónica

Gasa cortada en cuadros                                                     soluc. De formaldehido al 10%

Embudos de polietileno                                                      éter

Vasos de precipitado de 50 ml

Aplicadores de  madera

Pipetas pasteur con bulbo

Portaobjetos

Cubreobjetos

Microscopio

Método:

a)    Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. De materia fecal en el vaso de precipitado , se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza.

b)    Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico

c)    Se centrifuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm

d)    Se decanta el sobrante y se resuspende el sobrante el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más.

e)    Al ultimosedimentose le agregan 5 ml de solución de formaldehido al 10% se mezcla y se deja reposar 10 minutos.

f)     Se añaden después  .5 ml de eter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos-

g)    Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm

h)   Después de centrifugar se observan cuatro capas

v  Eter superficial

v  Un tapon de restos fecales

v  Formaldehido

v  Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

i)     Se decanta el sobrante

j)     Se introduce la pipeta pasteur hasta el el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.

k)    Se le añade una gota d lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.

l)     Se observa la preparación en el microscopio con objetivos ed 10X y 40X.

 

OBSERVACIONES:

Logramos observar algunas fibras, y tejido muscular, y dado que el profesor nos pidio una muestra con moco y sangre se predispuso que encontrariamos entamoeba histolytica, y si observamos alunos de sus quistes, que es la forma infectante.